生物透射电镜TEM测试检测

  • 国家
    日本日立
  • 型号
    H7650
  • 测试项目
    适合观察细菌、组织、细胞、器官等生物样品的超微结构和高分子、胶束等有机样品
  • 样品要求
    样品需要固定在戊二醛溶液中,样品厚度1mm长2-3mm宽2-1.5mm
  • ●  样品要求:
    大       小:样品厚度1mm长2-3mm宽2-1.5mm,取材太大会严重影响实验结果,同一标本可取2-3条组织,2.5%中性戊二醛固定液要装满;取样需要准确,则会观察不到目标结构。
    官腔类样品:对动物的管腔类样品(肠道、血管等)在固定之前用10%胰蛋白酶消化处理,时间5分钟,处理后用PBS清洗三次,再用2.5%中性戊二醛固定;
    植物、昆虫等密度比固定液低的样品:必须先用针筒或抽真空仪器先抽气,再使标本沉入2.5%中性戊二醛液中;
    时      间:标样浸入2.5%中性戊二醛中的时间不能超过一周,需要低温(2-8°)保存,严禁冷冻。
    如果送样中有对比样品请用编号标出,并说明,并且需要提供参考文献中的图片做为参考。(即原样和特殊处理过的样品比对)
     
    ●  技术参数:
    技术指标
    分辨率:0.2nm (晶格像)
    加速电压:40kV ~ 120kV
    连续模式:x200~x600,000
    低倍模式:x50 ~ x1,000
    图像旋转:
    倍率范围:x1,000 ~ x40,000
    旋转角度:±90o (15o每步)
    数字相机:1,024 x 1,024象素
    样品台:测插式优中心测角台
    样品台移动:X/Y:±1mm Z:±0.3mm
    倾斜角度:±20o(±60o可选)
    功能:图像导航功能和样品位置记忆功能
  •   合作案例(获取更多案例,请联系业务人员)

  •   生物透射电镜样品选材办法

      (一)安排和器官选材办法:

      事前准备好所需的器械和固定液,并把它放4℃冰箱内预冷备用。如为穿刺物(肾安排、肝安排、脾安排等)、剪取物(胃镜剪取物、支气管镜剪取物、肠镜剪取物等)、手术切除物(肿瘤安排以及试验动物脏器等),均应在离体后敏捷用生理盐水冲刷后或直接投入预冷的2.5%戊二醛固定液(保质期为1个月)内,并把它放4℃冰箱内保存,一般要求在两分钟内完结。在处理手术切除物时,应事前准备好两把尖利的刀片(如剃须刀或手术刀)和蜡板,把固定液滴在蜡板上,再把切下来的脏器用手术刀切成小块,放在蜡板上的固定液中,接着用双刀片拉锯法在固定液中将安排切成约1立方毫米巨细或横切面约1平方毫米的长条形,然后用牙签或镊子(悄悄夹住,制止揉捏)把安排移入装有固定液的小瓶内,瓶子主张用带螺纹密封的样本瓶(见下图),保证固定液不会溢出,固定液一定要加注到瓶子的九成满。如为肺安排,应在固定液中充沛震动,使其完全沉到瓶底停止。

      (二)游离细胞选材法:

      安排培育和游离细胞(如血细胞、掉落细胞以及细菌病毒等),常悬浮涣散在介质中,首要有必要将其凝聚成团,然后进行固定,详细做法如下:

      1、血浆凝聚法:将抗凝全血离心分层(2000转/每分钟,10—20分钟),用毛细吸管沿着管壁悄悄的将上清夜汲取(不要损坏白细胞层),接着用吸管汲取固定液,并沿着管壁将2.5%戊二醛固定液慢慢地参加进行固定,然后把它放在4℃冰箱内保存。

      2、血浆(血清)混合法:如为细菌、病毒、掉落细胞、培育细胞则先将它们制成悬液放置于离心管内(最好是玻璃的),离心成团(1000~3000转/分钟,10分钟,下同),去上清液后参加2.5%戊二醛固定10分钟左右,离心,再弃去多余的固定液,然后和少量抗凝血浆或血清混合均匀,离心成团,去上清液(留少量),用吸管汲取2.5%戊二醛固定液沿着离心管壁缓慢滴入,尽量防止团块涣散,静置于4℃冰箱内保存备用。

      二、选材要求

      电镜生物样品制备的关键在于制出的样品有必要忠实地反映其日子时的状况,尽量防止“身后改动”和人为假象的发作,因而,选材这一步非常重要。选材要求如下:

      1、冷:选材的器械和固定液均应事前在4℃冰箱内预冷。

      2、快:选材时动作要快,所用的刀片要尖利,一般要求在脏器离体后1—2分钟内选材结束并放入2.5%戊二醛固定液内于4℃冰箱内保存。别的,应防止对安排的揉捏和人为损害。

      3、小:为了能让安排充沛固定,有必要把安排切成尽可能小的块,一般要求安排块在1立方毫米左右或横切面为1平方毫米的长条形,长度一般不超越3毫米,而皮肤、肌腱等安排较细密,选材应在1立方毫米以内。

      4、准:由于电镜标本要求小块选材,为了电镜调查的精确性,选材部位有必要要精确,并且,不同试验组的标本尽量取在相同部位(如心肌安排取左心室,则一概取左心室),不然,将无法比较,进而影响调查结果,最终导致电镜调查失利。

      三、各种安排选材办法:

      脑安排选材法

      在一般情况下,脑安排先进行灌注固定(4%多聚甲醛溶液),待固定完结后应立刻翻开颅骨,暴露出所要选材的方位,依据选材的要求以及试验意图割取相应的部位,如研讨脑神经轴索、髓鞘以及神经胶质细胞,主张选材于脑安排白质部分,此处有髓神经纤维相对较多,胶质细胞比较丰富;如要研讨神经元以及血脑屏障结构,主张选材于脑皮质的灰质部分,并且最好做定向包埋,以神经元长轴方向(大约为脑安排的矢状面)作为切面方向,这样能够很好地调查神经元细胞核、轴突以及树突结构的改变,突触以及毛细血管的结构也比较简单见到。

      肺安排选材法

      我们一定会觉得肺安排选材比较困难,由于肺安排内部气体无法完全排放而导致安排悬浮于固定液外表,使得固定液不能及时渗透进安排内部而导致大部分安排固定不良或无法固定。现在发起的仍是主动脉灌注固定。假如条件不老练,只能采纳浸泡固定。安排取出后尽量切得小,一起运用震动的办法将安排沉入固定液中,还有一种办法就是将安排放在载玻片上,并将固定液滴在其上,用别的一片载玻片悄悄压在上面并悄悄揉捏,一压一松,能够看到固定液内有小气泡溢出,直到小气泡消失停止,但有必要留意力度不能太大,不然,安排的细胞将会被损坏。

      需求留意的是,在固定之前,选材者有必要清楚自己的研讨意图,然后采纳相应部位进行选材。假如以研讨支气管黏膜为主的(这儿指肺内的支气管),尽量选材于靠近肺门部位,这儿有具有软骨的大支气管,在肺叶的内侧1/2部分,有小支气管、细支气管以及终末细支气管;假如首要研讨肺泡上皮细胞、终末细支气管、呼吸性细支气管以及肺泡隔的结构等,主张选材于肺叶靠近胸膜一侧或许肺尖部;假如研讨肺动脉内皮或壁的结构,主张选材于肺门邻近的肺叶安排,这儿的巨细动脉数量比较多,而远侧肺呼吸部的动脉极少。

      睾丸及附睾安排选材办法

      由于睾丸安排比较松软,固定难度较大,现在大多采纳灌注固定法进行固定,但此办法假如处理不妥,很可能会形成固定不良,原因是睾丸的血供离心脏比较远,固定液难以抵达,睾丸曲细精管基膜比较厚,固定液难以渗透,导致固定不良。堂兄弟院校电镜室了解到,我们还能够选用打针固定法即用打针针直接插入睾丸内部,从多个方向进行打针固定液,然后割取调查部位进行进一步浸泡固定;别的一种办法就是直接割取调查部位进行浸泡固定,需求留意的是,选材的睾丸安排有必要切的很细,让固定液直接渗透入曲细精管的断面,这样,各层生殖细胞都会得到很好的固定,不过比较费事的就是每次操作后都要离心处理。

      别的需求留意的是,要调查生精细胞,有必要选材于睾丸的睾丸网部位,假如选材于直精小管部位,就看不到生精细胞了,切切留意!大鼠与小鼠的睾丸网比较表浅,就在白膜下邻近。假如要调查老练精子,最好选材于附睾的尾部,此处精子已根本老练,并且精子密度最高。

      肾安排选材法

      肾外包被一层薄膜,首要由纤维安排和少量平滑肌组成。一般肾标本选材部位在肾本质,本质由皮质与髓质两部分组成,一般选材部位在肾皮质,皮质位于肾的外周,其厚度因动物品种不同而有差异,一般在1mm—4mm。肾安排除了采纳灌注固定外,直接浸泡固定的作用也是比较满意。肾安排选材相对比较简单,一般临床上均选用穿刺术,然后依据需求切取皮质或髓质进行调查。动物肾安排选材要留意的是,一要选材方位选择在肾的上极,二要精确断定皮质与髓质的方位,假如是皮质部位,只要将包膜别离后,将肾最外层安排取下来即可,这儿一般都会有肾小球存在。

      动脉选材法

      动脉遍及全身,直径巨细不同,一般小动脉(直径小于1mm)切生长约2mm短柱状即可.假如是大动脉,能够将动脉剖开,沿着纵轴将动脉壁切成约长2mm宽1mm的长条形.留意,在选材时尽量运用尖利的刀片(最好用剃须刀),且不要揉捏血管,由于血管内皮比较软弱,简单受伤掉落.包埋时应作好定向包埋.

      骨安排选材法

      骨安排散布广,有的较硬,有的较软,骨安排由于无机物堆积较多(首要为钙盐的堆积)而较硬,有必要通过脱钙处理(软骨安排能够不必脱钙)。

      首要将骨安排切取一小片,大约1-2毫米巨细,通过4%戊二醛固定2小时以上,再经生理盐水漂洗后放入脱钙液内进行脱钙,一般选择温文的EDTA脱钙液(详细配方可参阅相关资料,这儿不详细叙说)进行脱钙,也可运用酸类进行脱钙,脱钙时刻视脱钙液不同而有差异,至于判别脱钙程度如何,能够运用镊子夹住骨片,悄悄将两端向中心压拢,感觉其弹性强度进而判别脱钙程度。脱钙完结后先经生理盐水漂洗后再用4%戊二醛固定2小时,然后按惯例办法进行处理。

      四、需求客户供给的资料:

      1、依照规范办法选材固定的试验样本(固定在戊二醛固定液中的样品)。

      2、透射电镜试验登记表,可将此资料电子版发送给对应的业务人员。

      五、样本贮存运送规范:

      1、贮存:样本选材后,4℃保存时刻不超越1 个月。

      2、运送:泡沫盒+冰袋的办法运送,样品用气泡膜包裹,防止标本瓶直触摸摸冰块,固定液加注至瓶体的九成满,牢记运用上述带螺纹和铝箔垫片的样本瓶,以免邮寄途中液体渗出,并在瓶体标示好编号。

      六、固定液配方

      A.2.5﹪戊二醛固定液的配方:0.2M 磷酸缓冲液50ml,25﹪戊二醛溶液(电镜专用) 10ml,加双蒸水至100ml,戊二醛溶液最终浓度为:2.5%,pH 值7.3-7.4,既是2.5%的电镜固定液。配比好的固定液一定要放入4℃冰箱低温冷藏。

      B.联络我公司购买配比好的2.5%戊二醛固定液,但需求冷藏运送。


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